Izolacja RNA z komórek

Celem poprawnego przygotowania próbek obejmujących komórki do ekstrakcji RNA prosimy o zostosowanie się do poniższych wytycznych.

Rekomendowana liczba komórek na próbkę: 1 × 10⁷ komórek

1. Komórki adherentne:

1. Przepłucz komórki adherentne buforem PBS (5 mL, wolnym od RNaz).
2. Usuń PBS i dodaj bufor Trizol.
3. Użyj pipety, aby pobrać zawiesinę komórkową i rozbić wszelkie widoczne grudki, mieszając do momentu, aż zawiesina stanie się klarowna.
4. Przełóż zawiesinę do probówek do wirowania o pojemności 2 mL (wolnych od RNaz).
5. Przechowuj probówki w temperaturze -80 °C.

2. Komórki zawiesinowe:

1. Przepłucz komórki zawiesinowe buforem PBS (1 mL, wolnym od RNaz).
2. Przenieś zawiesinę do probówek do wirowania o pojemności 2 mL (wolnych od RNaz).
3. Uzyskaj pelet komórkowy poprzez wirowanie przy 3000 g.
4. Dodaj bufor Trizol i użyj pipety, aby pobrać zawiesinę oraz rozbić wszelkie widoczne grudki, mieszając do momentu, aż zawiesina stanie się klarowna.
5. Przechowuj probówki w temperaturze -80 °C.

3. Inne przypadki:

• Dla użytkowników, którzy nie mają dostępu do buforu Trizol, komórki po oczyszczeniu mogą zostać zamrożone metodą “flash-freezing” w ciekłym azocie, a następnie przechowywane w temperaturze -80 °C.

Wysyłka:

• Próbki należy zapakować w suchy lód, aby zapewnić stabilność i jakość materiału podczas transportu.
• Szczegóły przygotowania próbek zostały opisane tutaj.